Dados do Trabalho

Título

Ensaios ex-vivo e in-vitro de inflamassomas oferecem suporte ao diagnóstico clínico e genético das doenças autoinflamatórias clássicas

Resumo

Justificativa: As inflammassomopatias clássicas são doenças autoinflamatórias de caráter genético que impõe dificuldade na prática clínica. Até o momento inexistem biomarcadores para o diagnóstico destas doenças.
Métodos: 30 pacientes foram selecionados de acordo com os critérios diagnósticos clínicos de Gattorno et al 2019. Dados clínicos e laboratoriais foram retrospectivamente analisados. Todos os exons codificantes dos genes NLRP3, MEFV e MVK foram sequenciados. PBMC foram separados por gradiente, colocadas em meio de cultura. As células foram tratadas com ATP e LPS (ativação de NLRP3); ATP, Garanilgaraniol (GGOH) e LPS (ativação e inibição MVK); colchicina e enterotoxina A do Clostridium difficile (ativação e inibição Pirina - MEFV). Níveis de IL-1β foram detectadas por ELISA no sobrenadante após cada estímulo em tempos variados para cada inflamassoma. Os resultados foram equiparados a controles de mesmo gênero e idade. Foi utilizado GraphPad Prysma 8.0 para análise estatistica.
Resultados: Foram encontrados 23 CAPS (40% heterozigotos NLRP3), 4 FMF (50% homozigotos, 25% heterozigotos MEFV) e 3 SIgD (75% homozigotos e 25% heterozigotos MVK). Todos os CAPS, geneticamente positivos ou não, apresentaram níveis de IL-1β após tratamento com LPS (150;75 pg/dL) sem incremento após tratamento com APT (156; 16 pg/dL) t (p<0,00001). Todos os pacientes geneticamente positivos bialélicos e monoalélicos, com HiperIgD apresentaram níveis de IL-1β após tratamento com LPS (270; 180 pg/dL) e inibição com GGOH (7; 2 pg/dL) (p<0,001). Apenas pacientes com mutações homozigóticas de FMF apresentaram produção de IL-1β após tratamento com TCDA (3043 pg/dL) e inibição com colchicina (215 pg/dL) (p<0,03).
Conclusões: Ensaios funcionais dos inflamassomas conferem auxílios para o diagnóstico de CAPS geneticamente negativas, nas SIgD com mutações heterozigóticas e para afastar o diagnóstico de FMF.